核酸提取儀,是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來自動(dòng)完成樣本核酸的提取工作的儀器,核酸提取儀分為兩類:一類是大型的自動(dòng)化的,一般稱為自動(dòng)液體工作站;另一類是小型自動(dòng)核酸提取儀,利用封裝好的配套試劑自動(dòng)完成提取純化過程。
配合提取單個(gè)標(biāo)本的獨(dú)立分裝試劑,操作過程中,只需要加入標(biāo)本動(dòng)作,儀器自動(dòng)完成提取純化的全過程,不需要加入提取過程中所需要的試劑過程,是真正得到應(yīng)用的小型自動(dòng)核酸提取儀。
1. 根據(jù)儀器型號大小不同劃分
1) 自動(dòng)液體工作站
自動(dòng)液體工作站是功能非常強(qiáng)大的設(shè)備,液體分液、吸液等自動(dòng)完成,甚至能通過整合擴(kuò)增、檢測等功能,實(shí)現(xiàn)標(biāo)本提取、擴(kuò)增、檢測全自動(dòng)化。提取核酸只是其功能的一個(gè)應(yīng)用,不太適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室提取核酸,一般都應(yīng)用在單一類標(biāo)本并且一次提取標(biāo)本量非常大(至少96個(gè),一般幾百個(gè))的實(shí)驗(yàn)需求上。自動(dòng)工作站的平臺建立及平臺的運(yùn)作,需要比較大的資金。
2) 小型自動(dòng)核酸提取儀
小型的自動(dòng)化儀器是通過運(yùn)行結(jié)構(gòu)的特殊性來達(dá)到自動(dòng)提取核酸的目的,可以在任何實(shí)驗(yàn)室得到應(yīng)用。
2. 根據(jù)提取原理不同劃分
1) 采用離心柱法的儀器
離心柱法核酸提取儀主要采用離心機(jī)和自動(dòng)移液裝置相結(jié)合的方法,通量一般在1-12個(gè)樣本,操作時(shí)間和手工提取差不多,并不能提高實(shí)際工作效率,且價(jià)格昂貴,不同型號儀器的耗材也不能通用,僅適合經(jīng)費(fèi)充足的大型實(shí)驗(yàn)室使用。
2) 采用磁珠法的儀器
以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,再通過移動(dòng)磁珠或轉(zhuǎn)移液體來實(shí)現(xiàn)核酸的整個(gè)提取純化過程。由于其原理的*性,所以可設(shè)計(jì)成很多種通量,既可以單管提取,也可以提取8-96個(gè)樣本,且其操作簡單快捷,提取96個(gè)樣本僅需30-45min,大大提高了實(shí)驗(yàn)效率,且成本低廉,因而可以在不同實(shí)驗(yàn)室使用,是目前市場上的主流儀器。
磁珠法自動(dòng)核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法
先說抽吸法:顧名思義,抽吸法就是通過自動(dòng)移液裝置來進(jìn)行,通過自動(dòng)移液裝置來加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脫緩沖液。從步驟上好像沒什么問題,但是抽吸法大的問題在于,為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉,這樣每一次抽廢液的時(shí)候總有一小部分不能*的抽走,特別是磁鐵在底部的裝置,因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,這樣漂洗液就不能*去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì)影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵在側(cè)面的裝置殘留的液體會(huì)少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時(shí)以上,所以有些96自動(dòng)核酸提取工作站,提取一輪的時(shí)間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時(shí)間可以提5輪了。
再說磁棒法核酸提取儀:通量通常有8、16、32、96通道,相對于抽吸法,磁棒法的優(yōu)點(diǎn)是每一步的液體不殘留,因?yàn)榇虐糁粠ё叽胖?,轉(zhuǎn)移到下一個(gè)步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器好要功能更齊全的,比如可以加熱,每個(gè)加熱槽好獨(dú)立溫控,這樣可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點(diǎn)是,帶動(dòng)磁棒的電機(jī)要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗*。磁棒法的通量選擇好是32通道,96通道的看似通量更高,但是有個(gè)很現(xiàn)實(shí)的問題,96個(gè)磁力棒在從一個(gè)板轉(zhuǎn)移至另外一個(gè)板的時(shí)候,磁力棒上面的液體中途滴下來怎么辦,它會(huì)滴到別的孔中造成污染,而32通道的磁力棒運(yùn)行軌跡不經(jīng)過其他樣本的上空,這樣不會(huì)交叉污染。